蛋(dàn)白(bái)印(yìn)跡儀(Western Blot System)是(shì)一種用於檢(jiǎn)測和分(fēn)析(xī)特(tè)定蛋白質(zhì)的實驗(yàn)設備(bèi)。其原(yuán)理(lǐ)包(bāo)括聚丙(bǐng)烯酰胺(àn)凝膠電(diàn)泳(分離蛋白質),轉(zhuǎn)膜(將(jiāng)蛋白質轉移(yí)到固相載體,如(rú)NC膜或PVDF膜),抗體(tǐ)孵育(特(tè)異性(xìng)抗體(tǐ)與(yǔ)目標蛋(dàn)白(bái)結合(hé)),顯色(sè)反應(標(biāo)記(jì)的二(èr)抗與底(dǐ)物反(fǎn)應,顯示目(mù)標蛋(dàn)白)。
蛋白印(yìn)跡(jì)儀廣(guǎng)泛(fàn)應用於(yú)生(shēng)物醫(yī)學研究(jiū)(如(rú)蛋(dàn)白(bái)質(zhì)表(biǎo)達(dá)分析,細(xì)胞(bāo)信號通(tōng)路(lù)研究(jiū)),臨床診(zhěn)斷(如HIV感染(rǎn)確認,自(zì)身免(miǎn)疫(yì)性(xìng)疾病檢(jiǎn)測),藥物研發(fā)(如生(shēng)物標(biāo)誌物發現,蛋白質相(xiāng)互(hù)作用(yòng)研究)等領(lǐng)域。其優勢在於高靈敏(mǐn)度(dù)和特(tè)異性,能夠(gòu)定量和定性(xìng)分析(xī)蛋(dàn)白質。
使用規(guī)範與(yǔ)注意(yì)事項:
1,實(shí)驗準備(bèi):
樣本需充分(fēn)裂解,定(dìng)量後(hòu)上樣(yàng)(避免過載導致條(tiáo)帶(dài)模(mó)糊)。
預(yù)製(zhì)膠需(xū)平(píng)衡(héng)至室溫,避免(miǎn)冷(lěng)凝水影(yǐng)響電泳(yǒng)。
2,轉(zhuǎn)膜(mó)優(yōu)化(huà):
PVDF膜需甲(jiǎ)醇(chún)激活(huó),NC膜需(xū)緩(huǎn)衝液浸潤。
轉膜時間根(gēn)據(jù)蛋白(bái)分子(zǐ)量調整(zhěng)(如100kDa蛋白需1.5小時(shí))。
3,抗(kàng)體(tǐ)孵育:
一抗濃度需(xū)預實驗確定(dìng),4℃過夜孵育效(xiào)果(guǒ)佳(jiā)。
二抗(kàng)需避(bì)光(guāng)保(bǎo)存(cún),現(xiàn)用現(xiàn)配。
4,設備維護:
定期清(qīng)潔(jié)電泳(yǒng)槽(cáo)和轉(zhuǎn)印(yìn)電(diàn)極,防止(zhǐ)蛋(dàn)白殘留。
校準(zhǔn)成像係(xì)統的(dí)光(guāng)強和曝(pù)光時間,確保定量準確(què)性。