蛋白印跡(jì)儀(yí)，也(yě)稱為Western Blot儀(yí)器，其(qí)基本(běn)原理是通(tōng)過(guò)特異性(xìng)抗體對(duì)凝膠電泳(yǒng)處理過(guò)的細(xì)胞(bāo)或生物組織(zhī)樣品(pǐn)進行著色。通(tōng)過分(fēn)析(xī)著色(sè)的位置和著色深(shēn)度，可以獲得(dé)特(tè)定蛋白質在所分析(xī)的細胞或組(zǔ)織中表達(dá)情況(kuàng)的信息。
 

　　核心步(bù)驟：
 

　　蛋白質電泳(yǒng)分(fēn)離：利用(yòng)電泳技術(shù)將(jiāng)細胞(bāo)或組(zǔ)織中(zhōng)的蛋(dàn)白(bái)質分(fēn)離。
 

　　轉(zhuǎn)膜：將分(fēn)離(lí)後(hòu)的(dí)蛋(dàn)白質(zhì)轉移到固(gù)相(xiāng)膜上，如硝酸纖(xiān)維素(sù)薄(báo)膜(NC膜)或PVDF膜(mó)。
 

　　封閉：使用封閉(bì)液封閉膜(mó)上(shàng)的(dí)非特異(yì)性(xìng)結合位(wèi)點。
 

　　抗(kàng)體孵(fū)育(yù)：將(jiāng)特異性(xìng)抗體(tǐ)與(yǔ)膜(mó)上(shàng)的蛋白(bái)質(zhì)進行(háng)孵育，使抗(kàng)體(tǐ)與(yǔ)目的(dí)蛋白質結合。
 

　　顯影：通(tōng)過底物(wù)顯色(sè)或熒光成(chéng)像等手段，檢測(cè)與(yǔ)抗(kàng)體(tǐ)結(jié)合的(dí)蛋(dàn)白質。
 

　　操作(zuò)使(shǐ)用需要注意哪(nǎ)些(xiē)事(shì)項
？
 

　　1，抗體選(xuǎn)擇(zé)：一抗的(dí)選(xuǎn)擇(zé)是(shì)影(yǐng)響免疫印跡成(chéng)敗(bài)的主(zhǔ)要(yào)因(yīn)素(sù)。多(duō)克(kè)隆(lóng)抗(kàng)體結合抗原(yuán)能力較(jiào)強(qiáng)，靈敏度高，但(dàn)易(yì)產生非特(tè)異性(xìng)的背景；單克(kè)隆抗(kàng)體識(shí)別(bié)抗(kàng)原(yuán)特(tè)異性(xìng)較(jiào)好，但可能(néng)不識別(bié)在(zài)樣品製備時(shí)因變性(xìng)而(ér)失(shī)去(qù)了空(kōng)間構(gòu)型的(dí)抗原表位。因(yīn)此(cǐ)，在選擇抗(kàng)體時(shí)需(xū)要根據(jù)實(shí)驗需求(qiú)進行權衡(héng)。
 

　　2，膜的(dí)選(xuǎn)擇：一(yī)般(bān)情況使(shǐ)用0.45μm的NC膜，0.1~0.2μm的小孔(kǒng)徑(jìng)膜隻(zhī)適合(hé)於分子(zǐ)量(liáng)小於20kD的蛋白質。PVDF尼龍(lóng)膜(mó)較(jiào)NC膜(mó)柔軟(ruǎn)，結(jié)實，靈(líng)敏(mǐn)度高(gāo)，易於(yú)操作且(qiě)蛋白質(zhì)結合能力(lì)強(qiáng)，但(dàn)背景也高(gāo)，需要(yào)加(jiā)強(qiáng)封閉(bì)。
 

　　3，操(cāo)作(zuò)細(xì)節：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注(zhù)意(yì)操作(zuò)細(xì)節(jié)，如(rú)避免濾(lǜ)紙/凝膠/轉印膜(mó)/濾紙(zhǐ)夾層(céng)組合(hé)中(zhōng)存在(zài)氣泡，以(yǐ)提高(gāo)轉(zhuǎn)膜(mó)效率；確(què)保(bǎo)上下兩(liǎng)層濾紙不能(néng)過(guò)大，避免導(dǎo)致(zhì)直(zhí)接接觸(chù)而(ér)引(yǐn)起短路(lù)等(děng)。
 

　　蛋白(bái)印跡(jì)儀是一(yī)種功能*且(qiě)應用(yòng)廣泛(fàn)的生物學和醫學(xué)研(yán)究(jiū)設(shè)備。通過(guò)正確使(shǐ)用和維護保養，可(kě)以為(wéi)科研人(rén)員(yuán)提供準(zhǔn)確(què)的實驗(yàn)結果和可靠(kào)的數(shù)據支(zhī)持。