蛋白質印跡法（免(miǎn)疫(yì)印跡試(shì)驗(yàn)）即Western Blot。它(tā)是(shì)分子生(shēng)物學
，生物化學(xué)和免疫遺傳學中(zhōng)常(cháng)用(yòng)的(dí)一種(zhǒng)實(shí)驗(yàn)方法(fǎ)。其(qí)基本(běn)原(yuán)理是通(tōng)過特(tè)異性抗體對凝膠(jiāo)電(diàn)泳(yǒng)處理過的(dí)細胞(bāo)或生物組(zǔ)織(zhī)樣(yàng)品(pǐn)進(jìn)行(háng)著色(sè)。通(tōng)過(guò)分(fēn)析(xī)著(zhuó)色的位置和著(zhuó)色深度獲得特定(dìng)蛋白(bái)質在所(suǒ)分(fēn)析(xī)的(dí)細胞(bāo)或(huò)組織(zhī)中表達情(qíng)況的(dí)信(xìn)息(xī)。

 

1
，標(biāo)準曲綫的(dí)製作

 

（1）從(cóng)－20℃將1mg/ml BSA取出，室溫(wēn)融化(huà)後(hòu)備用。

（2）將1.5ml離心管取(qǔ)18個，3個一(yī)組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。

（3）根(gēn)據(jù)下麵的表(biǎo)格將各種試劑加(jiā)入(rù)到各(gè)管中。

（4）混(hùn)匀(yún)後，室溫(wēn)放(fàng)置2分鐘，在(zài)生(shēng)物分(fēn)光光度(dù)計（Bio－Photometer，Eppentoff）上(shàng)比色分(fēn)析。

 

2
，樣(yàng)品蛋白含量(liáng)的(dí)檢測

 

（1）取(qǔ)1.5ml離心管(guǎn)足(zú)夠(gòu)多，將1ml4℃儲存的(dí)考馬(mǎ)斯亮藍溶(róng)液分別(bié)加入(rù)到(dào)每個(gè)離心管中，在室溫下放置(zhì)30分鐘(zhōng)以(yǐ)後(hòu)，就能夠被(bèi)用(yòng)來對蛋白(bái)進行(háng)檢(jiǎn)測。

（2）將(jiāng)100ul 0.15mol/L NaCl溶液加入(rù)到取出的(dí)一(yī)管考馬斯(sī)亮藍溶(róng)液(yè)中(zhōng)，混匀放(fàng)置2min中，就(jiù)能夠(gòu)作(zuò)為空白樣品，在比色(sè)杯中(zhōng)倒(dǎo)入空白(bái)樣品，在做好標準曲綫的程序(xù)下按(àn)blank對空(kōng)白樣(yàng)品進行檢測(cè)。

（3）將(jiāng)空白樣品(pǐn)棄(qì)掉(diào)，比色(sè)杯(bēi)使用(yòng)無水乙醇(chún)清洗2次（每次(cì)0.5mL），再將其使(shǐ)用無(wú)菌(jūn)水洗一(yī)次。

（4）將95ul 0.15mol/L NaCl加入到(dào)取出的(dí)一管(guǎn)考馬斯(sī)亮藍溶(róng)液中，混匀後靜置(zhì)2min，往(wǎng)扣(kòu)幹的比(bǐ)色(sè)杯(bēi)中倒入按sample鍵對樣品進(jìn)行檢(jiǎn)測。

 

 

蛋(dàn)白(bái)印跡儀被廣(guǎng)泛(fàn)應用於(yú)臨床診斷領域，如篩選(xuǎn)和確診(zhěn)引(yǐn)起(qǐ)感(gǎn)染(rǎn)性疾病(bìng)的(dí)不(bù)同致病(bìng)源(yuán)（如(rú)病(bìng)毒或細(xì)菌(jūn)），以及過(guò)敏原(yuán)鑒定。全自(zì)動蛋(dàn)白(bái)印跡(jì)儀(yí)能(néng)將(jiāng)蛋(dàn)白(bái)印跡處理(lǐ)中(zhōng)的所有(yǒu)關鍵步(bù)驟(zhòu)自動化，尤其是繁瑣的(dí)清洗和孵(fū)育步驟。