免(miǎn)疫(yì)印(yìn)跡（immunoblotting）又(yòu)稱(chēng)蛋白(bái)質(zhì)印跡(jì)（Western blotting），是(shì)根據抗原抗體(tǐ)的(dí)特異性結合檢(jiǎn)測復雜(zá)樣(yàng)品中的某(mǒu)種蛋白的(dí)方(fāng)法(fǎ)。該法是在(zài)凝(níng)膠電(diàn)泳(yǒng)和固(gù)相(xiāng)免疫測定技術(shù)基(jī)礎(chǔ)上發展起來的一種新(xīn)的(dí)免(miǎn)疫生化(huà)技術。由於免疫(yì)印跡(jì)具(jù)有(yǒu)SDS-PAGE的高分(fēn)辨力和(hé)固(gù)相免(miǎn)疫(yì)測定的高特異性和(hé)敏感性，現已成(chéng)為(wéi)蛋白(bái)分(fēn)析的一(yī)種常規技(jì)術。免(miǎn)疫印跡(jì)常(cháng)用(yòng)於(yú)鑒定(dìng)某種蛋白，並能對蛋(dàn)白進(jìn)行定(dìng)性(xìng)和半定(dìng)量分析。結合化(huà)學發光檢(jiǎn)測，可以(yǐ)同(tóng)時比(bǐ)較多個樣(yàng)品(pǐn)同(tóng)種蛋白的表(biǎo)達(dá)量差(chà)異。

　　由(yóu)於抗體(tǐ)僅與(yǔ)目標(biāo)蛋(dàn)白質結(jié)合(hé)，因此一般(bān)隻(zhī)能(néng)看(kàn)到(dào)一(yī)條(tiáo)清晰(xī)的帶(dài)，條(tiáo)帶的粗細對應於蛋(dàn)白質量。通過分析特(tè)定反(fǎn)應的位置(zhì)和強度(dù)，可(kě)以(yǐ)獲得(dé)目(mù)標蛋(dàn)白在給定細(xì)胞(bāo)或(huò)組(zǔ)織(zhī)匀漿中的(dí)表達(dá)信(xìn)息(xī)。由於凝(níng)膠電(diàn)泳(yǒng)的(dí)高(gāo)分辨(biàn)率和免疫的強特(tè)異(yì)性和高靈(líng)敏(mǐn)度(dù)，Western印跡分析(xī)可(kě)檢(jiǎn)測低(dī)至(zhì)1ng的(dí)靶蛋(dàn)白(bái)。該(gāi)方法廣泛(fàn)應(yīng)用於分(fēn)子(zǐ)生物學，生(shēng)物化(huà)學，免疫(yì)遺(yí)傳(chuán)學等(děng)分(fēn)子生物學領域(yù)。

　　全自動(dòng)WB工(gōng)作站操(cāo)作(zuò)步(bù)驟(zhòu)：

　　1.準備樣品

　　1）製冰(bīng)，準備(bèi)冰盒(hé)。

　　2）配(pèi)製(zhì)細胞裂解液(yè)：根據(jù)細(xì)胞(bāo)數(shù)量確定所(suǒ)需(xū)裂解液：50ul/六(liù)孔(kǒng)板一(yī)孔。

　　裂(liè)解液配方(fāng)：100ul碧雲(yún)天(tiān)裂(liè)解(jiě)液(yè)+1ul蛋白酶抑(yì)製劑(jì)混(hùn)合(hé)物+1ul PMSF

　　3）按實驗需(xū)要(yào)準(zhǔn)備(bèi)好(hǎo)細胞(bāo)：去掉培養基，1×PBS洗3次（去(qù)掉(diào)培(péi)養基(jī)中(zhōng)的血清），每個孔（6孔(kǒng)板(bǎn)）加入適(shì)量(liáng)的裂(liè)解液。迅速用(yòng)細胞刮(guā)刮下細(xì)胞(bāo)並轉移至(zhì)1.5ml管(guǎn)中(zhōng)，置(zhì)於冰上(shàng)20min，振蕩混(hùn)合後，再(zài)置冰上10min。

　　4）12，000g，4℃離心15min，收集上(shàng)清至(zhì)另(lìng)一1.5ml管。

　　5）取2.5ul樣品加(jiā)22.5ul三蒸水(shuǐ)稀釋(shì)，用(yòng)於(yú)BCA法(fǎ)測(cè)蛋白濃(nóng)度(dù)。

　　6）其餘(yú)樣品加(jiā)5×Loading Buffer（按2.5mlBuffer/10ml蛋白）用(yòng)95℃煮10分鐘(zhōng)，期(qī)間振(zhèn)蕩一次(cì)。

　　7）直(zhí)接上樣(yàng)跑(pǎo)膠(jiāo)或(huò)者(zhě)分(fēn)裝-80°C長(cháng)期保(bǎo)存。